Plasmide Double Nickase (m) Tctex1: sc-423318-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Tctex1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Tctex1 Double Nickase (m) et le plasmide Tctex1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dynlt1b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Tctex1 | sc-423318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Tctex1 | sc-423318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dynlt1b code la chaîne légère Tctex1 de la dynéine cytoplasmique chez la souris, un complexe moteur dépendant des microtubules qui assure le transport rétrograde, le positionnement des organites et des fonctions du fuseau mitotique. Tctex1 contribue au trafic, dépendant de la dynéine, de vésicules et de complexes protéiques, soutenant des processus tels que la signalisation intracellulaire, le transport neuronal et la ciliogenèse via une dynamique coordonnée des microtubules. Une perturbation des interactions des chaînes légères de la dynéine peut compromettre la liaison des cargos et la fidélité du transport, reliant ainsi les dysfonctionnements de la voie dynéine à des phénotypes pertinents pour le neurodéveloppement, la biologie des cils et le contrôle de la division cellulaire. Par conséquent, Dynlt1b est fréquemment étudié dans le contexte de la régulation du cytosquelette, de l’organisation du centrosome et du fuseau, ainsi que des voies de signalisation dépendantes du transport.
Tctex1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dynlt1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dynlt1b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dynlt1b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dynlt1b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.