TCP-1 γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403203

Descripción general

CCT3 codifica la subunidad gamma del chaperonino humano que contiene TCP-1 (TCP-1 γ), un componente central del complejo citosólico TRiC/CCT que impulsa el plegamiento dependiente de ATP de un amplio conjunto de proteínas cliente. TRiC/CCT mantiene la proteostasis al ayudar a la maduración de proteínas del citoesqueleto como la actina y la tubulina, y al influir en el plegamiento y la estabilidad de reguladores de la señalización y del ciclo celular. A través de estas funciones, TCP-1 γ contribuye a la organización del citoesqueleto, al control de calidad proteica y a la capacidad proliferativa; las alteraciones en la función del chaperonino se han vinculado con estrés proteotóxico y con cambios en la señalización del crecimiento. Se ha descrito expresión desregulada de subunidades de CCT en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su estudio en vías relevantes para la transformación oncogénica y el mal plegamiento proteico asociado a la neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TCP-1 γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCT3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCT3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCT3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TCP-1 γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCT3 para la investigación de la señalización de TCP-1 γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCT3 críticos para la función de TCP-1 γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCT3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCT3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TCP-1 γ (h) y el plásmido HDR TCP-1 γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCT3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCT3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.