Plasmide CRISPR/Cas9 KO TBZF (h): sc-417474

Présentation

ZNF675 code pour la protéine humaine TBZF, un facteur putatif de liaison à l’ADN à doigts de zinc impliqué dans la régulation transcriptionnelle et le maintien de programmes d’expression génique spécifiques de l’état cellulaire. En tant que régulateur vraisemblablement nucléaire, TBZF devrait influencer des processus associés à la chromatine tels que l’activité des promoteurs/activateurs (enhancers), la répression ou l’activation transcriptionnelle, et la coordination de réseaux de gènes en aval répondant aux voies de signalisation. La dérégulation des facteurs de transcription à doigts de zinc est fréquemment liée à des altérations des voies de différenciation, de prolifération et de réponse au stress, ce qui fait de ZNF675 une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle de la régulation génique dans des phénotypes cellulaires associés aux maladies. L’étude de la fonction de TBZF peut aider à préciser comment les circuits transcriptionnels s’intègrent à des voies plus larges régissant la stabilité du génome et l’homéostasie cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TBZF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZNF675 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZNF675, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZNF675 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TBZF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZNF675 pour l'étude de la signalisation de TBZF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZNF675 essentiels à la fonction de TBZF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZNF675 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TBZF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TBZF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZNF675. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TBZF plasmide HDR (h) et le TBZF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZNF675 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZNF675 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.