TBL3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411490-ACT

TBL3 (Transducin beta-like 3) kodiert ein konserviertes WD-Repeat-Protein, das überwiegend im Nukleolus lokalisiert ist und die Ribosomenbiogenese unterstützt, einschließlich der Prozessierung der prä-rRNA und der Reifung der kleinen ribosomalen Untereinheit. Durch die Koordination von Assemblierungs- und Qualitätskontrollschritten innerhalb nukleolärer RNA-Protein-Komplexe beeinflusst TBL3 die globale Translationskapazität und zelluläre Wachstumsprogramme. Störungen der Nukleolusfunktion und der rRNA-Prozessierung sind ein häufiges Merkmal proliferativer Stresszustände, wodurch TBL3 ein hilfreicher Ansatzpunkt ist, um zu untersuchen, wie die Ribosomenproduktion mit Zellzykluskontrolle und Proteostase verknüpft ist. Veränderte Expressions- oder Abhängigkeitsmuster von Faktoren der Ribosomenbiogenese, einschließlich TBL3, wurden bei Krebs und anderen Erkrankungen beobachtet, die durch eine dysregulierte Proteinsynthese gekennzeichnet sind.

TBL3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TBL3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TBL3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TBL3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TBL3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TBL3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TBL3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TBL3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TBL3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TBL3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.