Plásmido CRISPR de Activación (h) TASK-3: sc-403974-ACT

El KCNK9 humano codifica TASK-3 (K2P9.1), un canal de potasio de dos dominios de poro (K2P) que contribuye a la conductancia de K+ de “fuga” basal y ayuda a establecer el potencial de membrana en reposo y la excitabilidad de la membrana. TASK-3 es sensible al pH extracelular y modula las propiedades de disparo en tejidos excitables, vinculando la homeostasis iónica con programas de señalización celular como las vías dependientes de calcio y la transcripción regulada por la actividad. A través de su impacto en la polarización de la membrana, TASK-3 influye en procesos que incluyen la secreción neuronal y endocrina, la progresión del ciclo celular y la adaptación al estrés metabólico o hipóxico. La alteración de la expresión o la función de KCNK9/TASK-3 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y se ha estudiado en el contexto de la biología del cáncer, donde la señalización bioeléctrica dependiente de canales de potasio puede afectar la proliferación y la supervivencia.

TASK-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNK9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TASK-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNK9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNK9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TASK-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNK9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TASK-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TASK-3 en células tumorales con expresión de KCNK9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.