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TAPBPLCRISPR激活质粒(h) | sc-409990-ACT | 20 µg | $397.00 |
TAPBPL(TAP binding protein-like,类 TAP 结合蛋白)是一种驻留于内质网的免疫调节蛋白,可调控 MHC I 类复合物的肽段装载及其质量控制。通过与抗原呈递机制的组成成分相互作用,TAPBPL 有助于塑造细胞表面肽段–MHC I 复合物的谱系与稳定性,从而影响 CD8+ T 细胞的识别。其活性将内质网蛋白稳态(proteostasis)、肽段编辑与免疫监视通路联系起来,而这些通路在免疫逃逸等情境中常发生改变。因此,与 TAPBPL 功能相关的抗原呈递失衡,对于肿瘤免疫学、感染生物学以及炎症信号研究具有重要意义。
TAPBPL CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TAPBPL的表达。
TAPBPL CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TAPBPL基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TAPBPL转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TAPBPL表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TAPBPL位点,并能够研究内源性位点上依赖于TAPBPL的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TAPBPL表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TAPBPL通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。