Plasmide Double Nickase (m) TAP2: sc-423266-NIC

Tap2 chez la souris code TAP2, un transporteur de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette) qui forme un hétérodimère avec TAP1 afin de transloquer, du cytosol vers le réticulum endoplasmique, des peptides issus du protéasome pour leur chargement sur les molécules du CMH de classe I. Cette étape de transport est centrale dans le traitement et la présentation des antigènes et s’intègre aux voies de dégradation protéasomale, de chargement peptidique dans le RE et de surveillance immunitaire. Une activité TAP2 altérée peut remodeler l’immunopeptidome et moduler l’expression du CMH I à la surface cellulaire, avec des implications pour l’étude des interactions hôte–pathogène, des mécanismes d’échappement tumoral au système immunitaire et de l’inflammation induite par l’immunité dans des modèles expérimentaux. Tap2 est donc largement utilisé comme nœud génétique pour disséquer les programmes de présentation antigénique sensibles aux interférons et les déterminants de la reconnaissance par les lymphocytes T.

TAP2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tap2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tap2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tap2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tap2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.