Tafazzin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403588-ACT

O gene humano TAZ codifica a tafazzina, uma transacilase mitocondrial de fosfolipídios que remodela a cardiolipina para manter a arquitetura da membrana mitocondrial interna e otimizar a fosforilação oxidativa. Ao regular a composição das cadeias acílicas da cardiolipina, a tafazzina sustenta a estabilidade dos supercomplexos da cadeia respiratória, a dinâmica mitocondrial e o controle de qualidade associado à mitofagia. Alterações na remodelação lipídica mediada por TAZ estão ligadas à disfunção mitocondrial e a mudanças no metabolismo energético, com forte relevância para a síndrome de Barth e fenótipos relacionados de cardiomiopatia e miopatia. Assim, TAZ é amplamente estudado em vias que conectam a bioenergética mitocondrial, a homeostase redox e a sinalização lipídica de membrana.

Tafazzin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAZ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tafazzin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAZ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAZ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tafazzin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAZ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tafazzin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tafazzin em células tumorais com expressão de TAZ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.