Plasmide CRISPR/Cas9 KO T1R3 (h): sc-401808

Présentation

TAS1R3 code la sous-unité humaine du récepteur du goût T1R3, un RCPG de classe C qui forme un hétérodimère avec T1R1 ou T1R2 afin de détecter des ligands associés à l’umami et au sucré. Lors de l’activation, la signalisation couplée à T1R3 mobilise des protéines G hétérotrimériques et la cascade en aval PLCβ2–IP3–flux de Ca²⁺, conduisant à des réponses effectrices pouvant influencer la sécrétion et l’excitabilité cellulaire. Au-delà des tissus gustatifs, l’expression de TAS1R3 dans des épithéliums extra-oraux et des organes métaboliques a été utilisée pour étudier des circuits de détection des nutriments qui s’articulent avec des processus endocriniens et inflammatoires. Le dérèglement de la signalisation des récepteurs du sucré/de l’umami a été exploré dans des études portant sur l’homéostasie métabolique et les déficits chimiosensoriels, ce qui étaye sa pertinence en tant qu’outil moléculaire pour des recherches à l’échelle des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO T1R3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TAS1R3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TAS1R3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TAS1R3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine T1R3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TAS1R3 pour l'étude de la signalisation de T1R3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TAS1R3 essentiels à la fonction de T1R3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TAS1R3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le T1R3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le T1R3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TAS1R3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le T1R3 plasmide HDR (h) et le T1R3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TAS1R3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TAS1R3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.