Plasmide CRISPR d'Activation (h) Syntaxin 8: sc-405269-ACT

STX8 code la syntaxine 8, une protéine Q‑SNARE qui coordonne l’arrimage des vésicules et la fusion des membranes au sein du système endosomal. La syntaxine 8 participe au trafic endosome–réseau trans‑golgien et au trafic endolysosomal via l’assemblage de complexes SNARE, modulant le recyclage des récepteurs, le tri des cargaisons et la dégradation dirigée vers les lysosomes. En régulant la distribution et le renouvellement des récepteurs de signalisation et des transporteurs, STX8 influence l’homéostasie cellulaire, la signalisation immunitaire et les réponses au stress liées au transport vésiculaire. Un trafic endosomal dérégulé et des dysfonctionnements des SNARE sont fréquemment impliqués dans la neurodégénérescence, l’adaptation des cellules cancéreuses et la biologie des maladies infectieuses, ce qui fait de STX8 un nœud pertinent pour des études orientées voies de signalisation sur la dynamique membranaire.

Syntaxin 8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STX8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Syntaxin 8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STX8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STX8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Syntaxin 8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STX8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Syntaxin 8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Syntaxin 8 dans les cellules tumorales présentant une expression de STX8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.