Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Syntaxin 17 Double Nickase Plasmid (h): sc-403251-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Syntaxin 17 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Syntaxin 17 Double-Nickase-Plasmid (h) und Syntaxin 17 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf STX17 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Syntaxin 17: sc-518187
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Syntaxin 17 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Syntaxin 17 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STX17 kodiert Syntaxin 17, ein im ER verankertes SNARE-Protein, das an mitochondrienassoziierten Membranen und an Autophagosomen lokalisiert ist und dort die späte Autophagiephase vermittelt, indem es die Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen fördert. Über Interaktionen mit SNAP29 und VAMP8 unterstützt STX17 den autophagischen Flux, die Qualitätskontrolle von Organellen und die zelluläre Anpassung an Nährstoffstress, mit nachgeschalteten Effekten auf die mitochondriale Homöostase und die angeborene Immun-Signalgebung. Störungen des STX17-abhängigen Traffickings und der Autophagie wurden mit veränderter Mitophagie und einem Ungleichgewicht der Proteostase in Verbindung gebracht – Prozesse, die für Neurodegeneration, die Stress-Toleranz von Krebszellen und entzündliche Phänotypen relevant sind. Als Knotenpunkt an der Schnittstelle von Membranfusion und selektiver Autophagie wird STX17 häufig in Signalwegen untersucht, die die lysosomale Funktion, den mitochondrialen Turnover und das Überleben von Zellen unter Stress steuern.
Syntaxin 17 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des STX17-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von STX17 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die STX17-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit STX17-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.