Plásmido CRISPR de Activación (h) Syntaxin 17: sc-403251-ACT

STX17 codifica la sintaxina 17, una proteína de la familia SNARE que se localiza en el retículo endoplásmico y en las membranas asociadas a las mitocondrias, y que favorece eventos de fusión de membranas esenciales para la homeostasis celular. La sintaxina 17 es un mediador clave de la fusión entre el autofagosoma y el lisosoma, coordinando las etapas tardías de la autofagia y la mitofagia con la entrega de carga a compartimentos degradativos. A través de su función en el tráfico vesicular y el control de calidad de orgánulos, STX17 influye en la proteostasis, la adaptación al estrés y vías de señalización metabólica que convergen con la función mitocondrial. La desregulación de las vías de autofagia y depuración mitocondrial en las que participa la sintaxina 17 se ha implicado ampliamente en la neurodegeneración, la biología de las infecciones y fenotipos de estrés celular asociados al cáncer, lo que impulsa estudios mecanísticos del control de la expresión de STX17.

Syntaxin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STX17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Syntaxin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STX17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STX17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Syntaxin 17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STX17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Syntaxin 17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Syntaxin 17 en células tumorales con expresión de STX17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.