Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423233

Übersicht

Syn1 kodiert für Synapsin Ia/b, ein neuronspezifisches Phosphoprotein, das mit synaptischen Vesikeln und dem Aktin-Zytoskelett assoziiert ist und so die Vesikel-Clusterbildung, die Aufrechterhaltung des Reservepools sowie die aktivitätsabhängige Neurotransmitterfreisetzung reguliert. Synapsin Ia/b wird durch calcium- und cAMP-abhängige Phosphorylierungskaskaden moduliert und verknüpft dadurch neuronale Aktivität mit der Mobilisierung synaptischer Vesikel und präsynaptischer Plastizität. Über diese Prozesse trägt Syn1 zur Reifung neuronaler Schaltkreise, zur Stabilität von Synapsen und zur kurzfristigen synaptischen Plastizität bei, die die Informationsverarbeitung im zentralen Nervensystem prägen. Veränderte Synapsin-Signalwege werden mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und werden häufig im Zusammenhang mit Anfallsanfälligkeit und synaptischer Dysfunktion untersucht.

Das Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Syn1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Syn1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Syn1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synapsin Ia/b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Syn1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synapsin Ia/b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Syn1-Exone abzielen, die für die Synapsin Ia/b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Syn1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Syn1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synapsin Ia/b HDR-Plasmid (m) und Synapsin Ia/b HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Syn1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Syn1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.