Plasmide Double Nickase (m) SUZ12: sc-424636-NIC

Suz12 code la protéine SUZ12, un composant central essentiel du complexe répressif Polycomb 2 (PRC2), qui coopère avec EZH2/EED pour déposer la marque d’histone répressive H3K27me3 et instaurer un silencement génique héréditaire. Dans les cellules de souris, SUZ12 contribue à réguler les programmes génétiques du développement, l’engagement de lignée et l’architecture de la chromatine en contrôlant la répression transcriptionnelle au niveau des promoteurs bivalents et d’autres loci cibles de Polycomb. Via une régulation épigénétique dépendante de PRC2, SUZ12 influence des processus tels que l’auto-renouvellement des cellules souches, la différenciation et le contrôle du cycle cellulaire, et sa perturbation est associée à des états transcriptionnels dérégulés pertinents pour la biologie du cancer et des phénotypes développementaux. Ces fonctions font de Suz12 une cible fréquemment utilisée pour étudier la répression médiée par la chromatine, la régulation des interactions enhancer–promoteur et des réseaux d’expression génique spécifiques au contexte.

SUZ12 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Suz12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Suz12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Suz12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Suz12.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.