Plasmide Double Nickase (h) survivin: sc-400205-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) survivin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide survivin Double Nickase (h) et le plasmide survivin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BIRC5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: survivin Antibody (D-8): sc-17779
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) survivin | sc-400205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) survivin | sc-400205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIRC5 code la survivine, une protéine multifonctionnelle de la famille des inhibiteurs de l’apoptose qui coordonne la survie cellulaire avec la progression mitotique. La survivine est un composant central du complexe passager des chromosomes et régule l’alignement des chromosomes, la fidélité du point de contrôle du fuseau mitotique et la cytocinèse, tout en modulant l’apoptose dépendante des caspases et les réponses au stress. Son expression est étroitement liée au contrôle du cycle cellulaire et à la signalisation des dommages à l’ADN, en intégrant des voies qui gouvernent la prolifération et la mort cellulaire programmée. Une activité dérégulée de BIRC5 est fréquemment associée à des seuils d’apoptose modifiés et à une mitose aberrante, faisant de la survivine un nœud moléculaire largement utilisé dans les études de biologie tumorale et de stabilité du génome.
survivin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BIRC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BIRC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BIRC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BIRC5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.