Plasmide CRISPR d'Activation (h) SUR-2: sc-401399-ACT

ABCC9 code le récepteur aux sulfonylurées 2 (SUR-2), une sous-unité régulatrice des canaux potassiques sensibles à l’ATP (KATP) qui relie l’état énergétique cellulaire à l’excitabilité membranaire. En s’assemblant avec des sous-unités de canaux potassiques à rectification entrante pour former des complexes KATP fonctionnels, SUR-2 contribue à ajuster la conductance potassique en réponse aux nucléotides et à des ligands pharmacologiques, influençant le tonus du muscle lisse vasculaire et l’activité électrique cardiaque. Cet axe de signalisation intègre la détection métabolique à l’homéostasie ionique et à la réponse au stress, affectant des processus tels que la vasodilatation, la dynamique du potentiel d’action et la protection lors de contraintes énergétiques. Des variations génétiques ou une dérégulation d’ABCC9 ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et systémiques impliquant l’excitabilité et la perfusion tissulaire, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques de la régulation des canaux et de la biologie cardiométabolique.

SUR-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCC9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SUR-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCC9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCC9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SUR-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCC9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SUR-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SUR-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCC9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.