Plasmide CRISPR d'Activation (h) SUMO-2: sc-401111-ACT

Le gène humain **SUMO2** code **SUMO-2**, un modificateur de type ubiquitine qui est conjugué de façon covalente à des protéines cibles dans le cadre d’un cycle dynamique de modification post-traductionnelle régulant la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et l’assemblage de complexes macromoléculaires. La SUMOylation dépendante de SUMO-2 influence la signalisation et la réparation des dommages à l’ADN, l’organisation de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et la progression du cycle cellulaire via des cascades enzymatiques SUMO E1/E2/E3 et une déSUMOylation coordonnée par les protéases SENP. SUMO-2 peut former des chaînes poly-SUMO qui interagissent avec des ligases ubiquitine ciblant SUMO, reliant ainsi la SUMOylation à la protéostasie et aux réponses d’adaptation au stress. Une activité SUMO2 dérégulée et des profils de SUMOylation altérés sont fréquemment étudiés dans des contextes de signalisation oncogénique, de neurodégénérescence et de stress inflammatoire, où des changements à l’échelle des réseaux de transcription et du maintien du génome sont impliqués.

SUMO-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUMO2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SUMO-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUMO2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUMO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SUMO-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUMO2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SUMO-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SUMO-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUMO2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.