SULT1E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423185

Übersicht

Sult1e1 kodiert die Östrogensulfotransferase (SULT1E1), ein zytosolisches Konjugationsenzym der Phase II, das die Sulfatierung von Östrogenen katalysiert und dadurch inaktive, besser wasserlösliche Steroidsulfate erzeugt. Durch die Regulation des Gleichgewichts zwischen aktiven und konjugierten Östrogenen beeinflusst SULT1E1 die Signalübertragung über Östrogenrezeptoren sowie deren Wechselwirkungen mit hepatischen Xenobiotika‑Stoffwechselwegen, einschließlich Interaktionen mit der Steroidhomöostase, dem Gallensäure‑Handling und umfassenderen Sulfotransferase‑Netzwerken. Eine veränderte SULT1E1‑Aktivität kann hormonabhängige Transkriptionsprogramme verschieben und wurde mit metabolischen und entzündlichen Zuständen in Leber‑ und Fettgewebe sowie mit hormonresponsiven Phänotypen in der Reproduktionsbiologie in Verbindung gebracht. In Mausmodellen ist Sult1e1 daher relevant für die Untersuchung endokriner Regulation, geschlechtsspezifischer Unterschiede im Stoffwechsel und der gewebespezifischen Kontrolle der Steroid‑Signalübertragung.

Das SULT1E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sult1e1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sult1e1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sult1e1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SULT1E1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sult1e1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SULT1E1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sult1e1-Exone abzielen, die für die SULT1E1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sult1e1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SULT1E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SULT1E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sult1e1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SULT1E1 HDR-Plasmid (m) und SULT1E1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sult1e1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sult1e1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.