Plasmide Double Nickase (m) Su[fu]: sc-423973-NIC

Sufu (Suppressor of Fused) code un inhibiteur intracellulaire clé de la signalisation Hedgehog, qui freine les facteurs de transcription GLI et contribue à définir les seuils d’activation de la voie lors de la mise en place des structures embryonnaires et de l’homéostasie tissulaire. Dans les cellules de souris, Su[fu] régule la maturation/processing des protéines GLI, leur localisation nucléaire et la sortie transcriptionnelle en aval de PTCH1/SMO, ce qui le relie à une signalisation dépendante du cil primaire et à des programmes génétiques du développement. L’altération de la fonction de SUFU est associée à une activité anormale de la voie Hedgehog, impliquée dans des malformations congénitales et des processus tumorigènes, faisant de Sufu une cible largement utilisée pour étudier le contrôle de la transduction du signal. Les modèles centrés sur Sufu permettent également d’explorer les interactions (cross-talk) de la voie avec la régulation du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien des cellules souches/progénitrices.

Su[fu] Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sufu dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sufu. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sufu. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sufu.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.