Plásmido Doble Nickase (h) Stim1: sc-401311-NIC

STIM1 (molécula 1 de interacción estromal) es un sensor de Ca2+ residente en el RE que acopla el agotamiento de las reservas de calcio luminal a la activación de la entrada de calcio operada por depósito (SOCE) mediante la interacción con canales ORAI en las uniones entre el RE y la membrana plasmática. A través de la regulación de la dinámica citosólica de Ca2+, Stim1 coordina vías de señalización posteriores, incluidos programas transcripcionales de calcineurina–NFAT, la remodelación del citoesqueleto y el control dependiente de calcio de la proliferación y la secreción. La SOCE dependiente de STIM1 es fundamental para la activación de células inmunitarias y para una señalización más amplia de respuesta al estrés, y las alteraciones en la función o la expresión de STIM1 se han asociado con disfunción inmunológica, miopatías y fenotipos de señalización de calcio vinculados a tumores. Estas propiedades convierten a STIM1 en un nodo ampliamente utilizado para diseccionar redes de señalización de calcio y respuestas transcripcionales acopladas a estímulos en modelos celulares humanos.

Stim1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STIM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STIM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STIM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STIM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.