Particules Lentivirales d'Activation (h) St3Gal-III: sc-406298-LAC

ST3GAL3 code la sialyltransférase St3Gal-III, résidente de l’appareil de Golgi, qui catalyse l’ajout d’acide sialique lié en α2,3 au galactose sur les glycoprotéines et les glycolipides, façonnant les structures glycanes terminales à la surface cellulaire et sur les protéines sécrétées. En contrôlant les profils de sialylation, St3Gal-III influence la maturation des glycoprotéines, la stabilité des récepteurs et les interactions médiées par les lectines qui affectent la signalisation cellulaire, l’adhésion et la reconnaissance immunitaire. L’activité de ST3GAL3 contribue à des voies plus larges de glycosylation qui régulent le trafic via la voie sécrétoire et le remodelage du glycocalyx. Des variations génétiques ou une dérégulation de ST3GAL3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des signatures du glycome altérées, pertinentes pour la fonction neuronale et pour des modifications, liées à la maladie, de la communication cellule–cellule.

Les particules d'activation lentivirales St3Gal-III (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ST3GAL3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales St3Gal-III (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ST3GAL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de St3Gal-III. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ST3GAL3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.