SSX7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403553-ACT

SSX7 (Synovialsarkom, X-Breakpoint 7) kodiert ein dem Cancer-Testis-Antigen ähnliches Protein innerhalb der SSX-Familie, die durch eine eingeschränkte Expression in normalen Geweben und Funktionen in der Transkriptionsregulation gekennzeichnet ist. Es wird angenommen, dass SSX7 an chromatinassoziierten Prozessen und an der Modulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, die Zellidentität und Proliferation beeinflussen. Eine dysregulierte Expression von SSX-Familienmitgliedern wurde mit tumorassoziierten Transkriptionszuständen und immunogener Antigenpräsentation in Verbindung gebracht, was seine Eignung als molekularer Marker in der Krebsbiologie unterstützt. Die Untersuchung von SSX7 trägt dazu bei, Mechanismen der epigenetischen Kontrolle, das Gleichgewicht zwischen transkriptioneller Repression und Aktivierung sowie die nachgeschaltete Umgestaltung von Signalwegen in transformierten Zellen zu klären.

SSX7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SSX7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SSX7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SSX7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SSX7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SSX7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SSX7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SSX7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SSX7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SSX7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.