Plasmide CRISPR d'Activation (h) SSTR4: sc-403781-ACT

SSTR4 code le récepteur de la somatostatine 4, un RCPG couplé à Gi/Go qui se lie aux peptides de somatostatine afin de moduler l’activité de l’adénylate cyclase et la signalisation en aval via l’axe AMPc/PKA. L’activation du récepteur peut influencer la signalisation MAPK, les flux calciques et la régulation des canaux ioniques, façonnant l’excitabilité neuronale et les réponses sécrétoires de manière dépendante du contexte. SSTR4 est exprimé dans de nombreux tissus, avec des rôles marqués dans les circuits neuroendocriniens et sensoriels, où il contribue à la régulation de la neurotransmission et des réseaux de signalisation inflammatoire. Des altérations de la signalisation des récepteurs de la somatostatine, y compris des voies associées à SSTR4, sont étudiées dans des troubles impliquant le traitement de la douleur, la neuroinflammation et une signalisation hormonale dérégulée.

SSTR4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SSTR4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SSTR4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SSTR4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SSTR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SSTR4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SSTR4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SSTR4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SSTR4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SSTR4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.