SSH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433087
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SSH1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SSH1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SSH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433087 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La fosfatasa proteica Slingshot 1 (SSH1) es una fosfatasa de cofilina que regula el recambio de los filamentos de actina al desfosforilar y activar ADF/cofilina, promoviendo así el seccionamiento de la F-actina y la remodelación del citoesqueleto. En células de ratón, SSH1 integra señales de GTPasas de la familia Rho y de quinasas como LIMK para controlar la dinámica de los lamelipodios, la polaridad celular, la adhesión y la migración direccional. Este eje regulador de la actina influye en la endocitosis, el crecimiento de neuritas y la mecanotransducción, vinculando la actividad de SSH1 con procesos relevantes para el desarrollo, el tráfico de células inmunitarias y la remodelación tisular. La desregulación de la señalización cofilina–LIMK–SSH se ha asociado con comportamientos invasivos alterados y respuestas al estrés en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que convierte a Ssh1 en un objetivo útil para el análisis de esta vía.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SSH1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ssh1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ssh1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ssh1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SSH1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ssh1 para la investigación de la señalización de SSH1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ssh1 críticos para la función de SSH1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ssh1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SSH1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SSH1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ssh1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SSH1 (m) y el plásmido HDR SSH1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ssh1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ssh1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.