SRY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404342

Übersicht

SRY codiert den Transkriptionsfaktor „sex-determining region Y“, ein HMG-Box-DNA-bindendes Protein, das die männliche Geschlechtsbestimmung einleitet, indem es die frühe Gonadendifferenzierung in Richtung Hodenentwicklung lenkt. Durch die Regulation transkriptioneller Programme in der bipotenten Gonade stößt SRY nachgeschaltete Signalwege an, einschließlich der Aktivierung von SOX9 und umfassenderer Gennetzwerke, die die Festlegung der Sertoli-Zelllinie koordinieren und ovarienfördernde Signale unterdrücken. Eine Störung oder Fehlregulation der SRY-Funktion ist mit Störungen der Geschlechtsentwicklung (Disorders of Sex Development, DSD) assoziiert, darunter 46,XY-Gonadendysgenesie und Geschlechtsumkehr-Phänotypen, wodurch SRY zu einem zentralen Ziel für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle entwicklungsbiologischer Schicksalsentscheidungen wird. In zellulären Modellen dient SRY als gut handhabbarer Knotenpunkt, um chromatinabhängige Genregulation und die Aktivität von Transkriptionsfaktoren, die Zelllinien festlegen, zu untersuchen.

Das SRY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SRY-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SRY-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SRY nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SRY-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SRY-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SRY-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SRY-Exone abzielen, die für die SRY-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SRY-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SRY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SRY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SRY-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SRY HDR-Plasmid (h) und SRY HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SRY-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SRY-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.