Plasmide Double Nickase (h) SRPK1: sc-402855-NIC

SRPK1 code la sérine/arginine‑rich protein‑specific kinase 1, un régulateur conservé de l’épissage du pré‑ARNm qui phosphoryle les facteurs d’épissage SR afin de contrôler leur localisation et leur activité. En modulant le choix des sites d’épissage et l’inclusion des exons, SRPK1 influence des programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress et aux sorties de signalisation dépendantes de l’épissage alternatif. L’activité de SRPK1 s’articule avec des voies de maturation de l’ARN dépendantes de la phosphorylation et peut remodeler le paysage des isoformes de transcrits, avec des effets sur l’apoptose, la prolifération et la dynamique du cytosquelette. Une dérégulation du contrôle de l’épissage médié par SRPK1 a été associée à des phénotypes pertinents pour des maladies en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence et dans des mécanismes liés à l’angiogenèse, ce qui en fait une cible intéressante pour des études mécanistiques de la régulation dépendante de l’épissage.

SRPK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SRPK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SRPK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SRPK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SRPK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.