Plásmido Doble Nickase (h) SRPK1: sc-402855-NIC

SRPK1 codifica la quinasa 1 específica de proteínas ricas en serina/arginina, un regulador conservado del empalme del pre-ARNm que fosforila factores de empalme SR para controlar su localización y actividad. Mediante la modulación de la selección de sitios de empalme y la inclusión de exones, SRPK1 influye en programas de expresión génica vinculados a la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y las salidas de señalización que dependen del empalme alternativo. La actividad de SRPK1 se integra con vías de procesamiento de ARN dependientes de la fosforilación y puede remodelar el panorama de isoformas de transcritos, afectando la apoptosis, la proliferación y la dinámica del citoesqueleto. La desregulación del control del empalme mediado por SRPK1 se ha asociado con fenotipos relevantes para enfermedades en biología del cáncer, neurodegeneración y mecanismos relacionados con la angiogénesis, lo que respalda su uso como diana para estudios mecanísticos de la regulación dependiente del empalme.

SRPK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SRPK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SRPK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SRPK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SRPK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.