Plásmido Doble Nickase (h) SRC-1: sc-400879-NIC

NCOA1 codifica el coactivador del receptor de esteroides 1 (SRC-1), un coactivador transcripcional que conecta los receptores nucleares activados por ligando y otros factores de transcripción con complejos modificadores de la cromatina. SRC-1 coordina la acetilación y la remodelación de histonas para regular programas génicos implicados en la respuesta hormonal, la proliferación, el metabolismo y la diferenciación. Participa en redes de señalización impulsadas por los receptores de estrógeno, andrógeno, progesterona, glucocorticoides y hormona tiroidea, y converge con vías como MAPK/ERK y PI3K/AKT mediante dinámicas del coactivador dependientes de fosforilación. La expresión o actividad desregulada de NCOA1/SRC-1 se ha asociado con alteraciones de la señalización endocrina y con la reprogramación transcripcional observadas en múltiples cánceres y en contextos metabólicos e inflamatorios, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de regulación génica.

SRC-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCOA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCOA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCOA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCOA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.