SR-2C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400886

Übersicht

HTR2C kodiert den humanen Serotonin-2C-Rezeptor (SR-2C), einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor, der vor allem an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase-C-Signalübertragung, die Bildung von Inositoltrisphosphat, die intrazelluläre Mobilisierung von Ca2+ sowie die Aktivierung der Proteinkinase C zu stimulieren. SR-2C bindet außerdem MAPK/ERK-Signalwege ein und moduliert neuronale Erregbarkeit und synaptische Transmission über Effekte auf die Aktivität von Ionenkanälen und die Dynamik von Second Messengern. Im zentralen Nervensystem trägt HTR2C zur Regulation von Appetit, Stimmung, Stressreaktivität und endokrinen Ausgängen bei, indem es serotonerge Eingänge mit nachgeschalteten transkriptionellen und metabolischen Programmen integriert. Eine Fehlregulation der 5-HT2C-Signalgebung sowie RNA-Editing- bzw. Spleißvarianten innerhalb von HTR2C wurden in der Forschungsliteratur mit neuropsychiatrischen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistisches Ziel für Signalweg- und Genotyp-Phänotyp-Studien unterstreicht.

Das SR-2C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HTR2C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HTR2C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HTR2C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SR-2C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HTR2C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SR-2C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HTR2C-Exone abzielen, die für die SR-2C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HTR2C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SR-2C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SR-2C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HTR2C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SR-2C HDR-Plasmid (h) und SR-2C HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HTR2C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HTR2C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.