Plásmido CRISPR de Activación (h) SR-1B: sc-410541-ACT

HTR1B codifica el receptor humano de 5-hidroxitriptamina 1B (SR-1B), un GPCR acoplado a Gi/o que modula la liberación de neurotransmisores y la excitabilidad neuronal al inhibir la adenilato ciclasa, reducir la señalización de AMPc y regular la actividad de los canales iónicos. La señalización de SR-1B influye en la transmisión sináptica dentro de los circuitos serotoninérgicos y se integra con vías que controlan la liberación de dopamina y GABA, configurando el procesamiento de la recompensa, el control de impulsos y las respuestas al estrés. Las alteraciones en la expresión o la señalización de HTR1B se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y endofenotipos conductuales, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la regulación de las vías serotoninérgicas. Como receptor de membrana con expresión dependiente del contexto, SR-1B proporciona un nodo manejable para desentrañar programas transcripcionales impulsados por GPCR y la dinámica de mensajeros secundarios aguas abajo en modelos celulares humanos.

SR-1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTR1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SR-1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTR1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTR1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SR-1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTR1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SR-1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SR-1B en células tumorales con expresión de HTR1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.