Plásmido CRISPR de Activación (h) SR-1A: sc-401329-ACT

HTR1A codifica el receptor humano de 5‑hidroxitriptamina 1A (SR‑1A), un GPCR acoplado a Gi/o que regula la excitabilidad neuronal y la liberación de neurotransmisores tanto en el contexto de autorreceptor presináptico como postsináptico. La señalización de SR‑1A suprime la actividad de la adenilil ciclasa para reducir la salida de cAMP/PKA, activa los canales GIRK y las vías MAPK/ERK, y modula la dinámica del calcio para moldear la plasticidad sináptica y la respuesta al estrés. A través de estos procesos, HTR1A está estrechamente vinculado a la función de los circuitos serotoninérgicos y a la regulación neuroendocrina; las alteraciones en la expresión o la señalización del receptor se han implicado en la biología de las enfermedades neuropsiquiátricas, incluidos los mecanismos de los trastornos del estado de ánimo y de ansiedad.

SR-1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTR1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SR-1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTR1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTR1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SR-1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTR1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SR-1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SR-1A en células tumorales con expresión de HTR1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.