SPRED2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404738-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SPRED2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SPRED2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SPRED2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPRED2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SPRED2: sc-517018
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SPRED2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPRED2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPRED2 (Sprouty-related EVH1 domain containing 2) ist ein zytosolisches Adapterprotein, das als negativer Regulator der Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalübertragung wirkt, indem es die Aktivierung des RAF/MEK/ERK-(MAPK-)Signalwegs begrenzt. Durch die Interaktion mit Komponenten wie RAF und die Modulation RAS-abhängiger Signalproteinkomplexe trägt SPRED2 zur Kontrolle wachstumsfaktorgetriebener Proliferation, Differenzierung und entzündlicher Reaktionen bei. Eine veränderte Expression oder Funktion von SPRED2 wurde mit fehlregulierten MAPK-Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die sowohl in der Krebsbiologie als auch bei immunvermittelten Prozessen eine Rolle spielen, was seine Eignung als Knotenpunkt für die Untersuchung von Signaldämpfung und Rückkopplungskontrolle unterstreicht. In menschlichen Zellen bietet eine Störung von SPRED2 einen gut handhabbaren Ansatz, um das Crosstalk zwischen der MAPK-Signalgebung sowie nachgeschalteten transkriptionellen und zytoskelettalen Outputs zu untersuchen.
SPRED2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPRED2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPRED2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPRED2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPRED2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.