SPPL3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414174

Descripción general

La peptidasa de péptido señal tipo 3 (SPPL3) es una proteasa aspártica intramembrana de la familia GxGD que escinde proteínas de membrana de tipo II dentro de la vía secretora. Contribuye al desprendimiento (shedding) del ectodominio de proteínas y regula el procesamiento de múltiples sustratos, influyendo en el tráfico asociado al Golgi y al retículo endoplásmico (RE), la maduración de glicoproteínas y la presentación en la superficie celular de proteínas de membrana. La actividad de SPPL3 se ha relacionado con el control de la N-glicosilación al modular la abundancia y la localización de las glicosiltransferasas, conectándola con la proteostasis y el control de calidad de las proteínas de membrana. La desregulación de estos procesos es relevante para estudios sobre señalización inmunitaria, inflamación y cambios asociados al cáncer en la glicosilación y en la función de receptores de superficie celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPPL3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPPL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPPL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPPL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPPL3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPPL3 para la investigación de la señalización de SPPL3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPPL3 críticos para la función de SPPL3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPPL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPPL3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPPL3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPPL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPPL3 (h) y el plásmido HDR SPPL3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPPL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPPL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.