SphK1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423102-LAC

O gene Sphk1 do camundongo codifica a esfingosina quinase 1 (SphK1), uma quinase lipídica que fosforila a esfingosina para gerar esfingosina-1-fosfato (S1P), um esfingolipídeo bioativo que controla a sobrevivência, a proliferação, a migração celular e a sinalização inflamatória. Ao deslocar o reostato ceramida–esfingosina–S1P, a SphK1 ajuda a regular respostas ao estresse, a sensibilidade à apoptose e a dinâmica da sinalização por lipídios de membrana. A S1P produzida pela SphK1 pode atuar intracelularmente e também por vias dependentes de receptores de S1P, influenciando processos ligados a MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB. A desregulação da sinalização Sphk1/S1P é amplamente utilizada como eixo mecanístico em estudos, em modelos murinos, de tráfego de células imunes, biologia vascular, fibrose, inflamação metabólica e fenótipos associados ao microambiente tumoral.

As Partículas de Ativação Lentivirais SphK1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Sphk1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SphK1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Sphk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SphK1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Sphk1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.