Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sp2: sc-405026-ACT

Le gène humain **SP2** code Sp2, un facteur de transcription de la famille Sp/KLF exprimé de façon ubiquitaire, qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler la transcription basale de gènes impliqués dans la progression du cycle cellulaire, l’organisation de la chromatine et l’homéostasie métabolique. L’activité de Sp2 s’inscrit dans le contrôle de la transcription dépendante de l’ARN polymérase II et peut influencer des réseaux de régulation génique gouvernés par l’architecture des promoteurs et l’état épigénétique. Des programmes transcriptionnels Sp aberrants ont été associés à une prolifération altérée et à des voies de signalisation de réponse au stress, ce qui motive l’étude de **SP2** dans des contextes tels que le remodelage transcriptionnel oncogénique et des défauts de différenciation spécifiques de certaines lignées. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, Sp2 est fréquemment étudié pour son rôle dans l’occupation des promoteurs, les interactions entre facteurs de transcription et la modulation des voies en aval.

Sp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sp2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sp2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sp2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.