Plasmide Double Nickase (h) SP-lyase: sc-402278-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SP-lyase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SP-lyase Double Nickase (h) et le plasmide SP-lyase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SGPL1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SP-lyase | sc-402278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SP-lyase | sc-402278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SGPL1 code la sphingosine-1-phosphate lyase (SP-lyase) humaine, une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui catalyse le clivage irréversible de la sphingosine-1-phosphate (S1P) en hexadécénal et phosphoéthanolamine. En mettant fin à la signalisation de la S1P et en reliant le catabolisme des sphingolipides à la biosynthèse des phospholipides, la SP-lyase régule l’homéostasie lipidique, la composition membranaire et les gradients de lipides bioactifs qui influencent la migration cellulaire, la survie et les réponses inflammatoires. L’activité de SGPL1 s’inscrit à l’interface du métabolisme des sphingolipides, de la dynamique du rhéostat céramide/S1P et des voies de signalisation en aval médiées par des GPCR, qui façonnent les réponses cellulaires au stress et la fonction de barrière. Les perturbations génétiques de SGPL1 sont associées à des troubles multisystémiques caractérisés par des profils de sphingolipides altérés, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques des phénotypes induits par les lipides.
SP-lyase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SGPL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SGPL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SGPL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SGPL1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.