Plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-D (m): sc-422903

Présentation

Sftpd code la protéine D du surfactant (SP-D), une collectine sécrétée produite principalement par les pneumocytes alvéolaires de type II et les cellules de Clara, qui contribue à l’homéostasie du surfactant pulmonaire et à la défense immunitaire innée au niveau des surfaces muqueuses. SP-D reconnaît des motifs glucidiques présents sur les microbes et les cellules apoptotiques, favorisant l’opsonisation, l’agglutination et la modulation de l’activité des macrophages et des neutrophiles via des interactions dépendantes des lectines. Sur le plan fonctionnel, SP-D s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la protéostasie alvéolaire, la signalisation des cytokines inflammatoires et les réponses au stress oxydatif, qui façonnent l’intégrité de la barrière des voies aériennes. Une activité altérée de Sftpd/SP-D est associée à une inflammation et à un remodelage pulmonaires dysrégulés, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier, dans des modèles murins, les mécanismes de la lésion pulmonaire aiguë, des phénotypes de type asthme ou BPCO, ainsi que la susceptibilité aux infections respiratoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-D (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sftpd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sftpd, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sftpd à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SP-D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sftpd pour l'étude de la signalisation de SP-D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sftpd essentiels à la fonction de SP-D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sftpd pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SP-D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SP-D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sftpd. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SP-D plasmide HDR (m) et le SP-D (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sftpd pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sftpd définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.