Plasmide CRISPR d'Activation (h) SP-B: sc-401992-ACT

Le gène humain **SFTPB** code la protéine de surfactant B (SP-B), un peptide hydrophobe essentiel à la fonction du surfactant pulmonaire et à la stabilité alvéolaire. SP-B favorise l’adsorption et l’étalement des phospholipides à l’interface air–liquide, contribuant à une faible tension de surface et à des échanges gazeux efficaces, et participe au métabolisme du surfactant au sein des corps lamellaires ainsi qu’au trafic sécrétoire dans les pneumocytes de type II. Une expression ou une maturation altérée de SFTPB est associée à une perturbation de l’homéostasie du surfactant, à des réponses de stress épithélial et à une altération de la mécanique pulmonaire dans des affections caractérisées par une insuffisance respiratoire. En tant que facteur enrichi dans le poumon, SP-B est fréquemment étudiée dans les voies qui régissent la différenciation épithéliale, la gestion des lipides et la fonction de barrière innée.

SP-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFTPB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SP-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFTPB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFTPB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SP-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFTPB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SP-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SP-B dans les cellules tumorales présentant une expression de SFTPB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.