Sox2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423086-ACT

Sox2は、高移動度群（HMG）ボックス型の転写因子をコードしており、マウス胚および成体の幹細胞ニッチにおいて、多能性の維持と系譜決定を中核的に制御する因子として機能する。SOX2はOCT4およびNANOGと協調して、自己複製を維持しつつ早期の分化を抑制するクロマチンのアクセシビリティと転写プログラムを制御し、とりわけ神経前駆細胞の維持や感覚器の発生に重要な役割を担う。さらに、Wnt/β-カテニン、FGF/ERK、BMP、Notchシグナルと交差する発生過程の遺伝子制御ネットワークに関与し、細胞運命決定を協調的に調整する。SOX2発現の破綻は発生異常と関連し、がんにおける幹細胞性（stemness）の獲得にも頻繁に関与することから、in vitroで分化異常や腫瘍様の転写状態をモデル化する上でも重要である。

Sox2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sox2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sox2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sox2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSox2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sox2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSox2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSox2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSox2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSox2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。