Sox2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400050-ACT

SOX2はSox2転写因子をコードしており、多能性と自己複製の中核的制御因子として、OCT4およびNANOGと協調して幹細胞のアイデンティティを維持しつつ、系譜へのコミットメント（分化方向づけ）を抑制します。ヒト細胞においてSox2は、クロマチンリモデリング、神経外胚葉の規定、ならびにWNT、SHH、BMP、FGF、Notchを含む発生シグナル伝達ネットワークに関わる遺伝子プログラムを制御します。SOX2発現の制御異常は、分化状態の変化、異常増殖、細胞可塑性と関連し、神経発達異常や腫瘍生物学の文脈で報告されています。これらの特性により、SOX2は転写回路、エピジェネティック制御、そして細胞運命転換を研究するための広く用いられる重要なノードとなっています。

Sox2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sox2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sox2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSox2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSox2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。