Sox-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423091-ACT

O gene Sox7 de camundongo codifica o fator de transcrição Sox-7, um membro do grupo F da família SOX que regula a diferenciação endotelial, a morfogênese vascular e a manutenção da identidade celular durante o desenvolvimento. O Sox-7 atua em programas transcricionais que se cruzam com a sinalização angiogênica e a homeostase vascular, incluindo interações com as vias associadas a Wnt/β-catenina e Notch. Alterações na atividade de SOX7 têm sido associadas à desregulação da expressão gênica endotelial e à formação anômala de vasos, tornando-o relevante para estudos de defeitos do desenvolvimento e de mecanismos de doenças relacionadas ao sistema vascular. Além de suas funções no endotélio, o Sox-7 pode influenciar redes regulatórias epitélio–mesênquima e programas de especificação de linhagem usados para modelar o remodelamento tecidual.

Sox-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sox7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sox7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sox7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sox7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-7 em células tumorais com expressão de Sox7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.