Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-5: sc-401854-ACT

SOX5 code le facteur de transcription Sox-5, membre de la famille SOX, qui se lie à l’ADN via une boîte HMG et coordonne des programmes d’expression génique spécifiques de lignée au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Dans les cellules humaines, Sox-5 contribue à la régulation de la chondrogenèse et de la neurogenèse en modulant l’activité des enhancers et en coopérant avec d’autres régulateurs transcriptionnels pour orienter la différenciation, la prolifération et les décisions de destin cellulaire. Les réseaux transcriptionnels associés à SOX5 recoupent des voies contrôlant l’organisation de la matrice extracellulaire et la maturation neuronale, reliant son activité à des processus qui influencent l’architecture des tissus et la formation des circuits. Une expression ou une fonction dérégulée de SOX5 a été impliquée dans des troubles du développement et dans un remodelage transcriptionnel lié au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les relations génotype-phénotype.

Sox-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.