Plásmido CRISPR de Activación (h) Sos 1: sc-401135-ACT

El SOS1 humano codifica Sos 1, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de Ras que acopla los receptores tirosina quinasa activados y proteínas adaptadoras como GRB2 a la activación de RAS al promover el intercambio de GDP por GTP. A través de esta función, propaga el flujo de señal hacia la cascada RAF–MEK–ERK (MAPK) y se conecta con salidas de señalización relacionadas con PI3K que regulan la proliferación, la diferenciación, la motilidad y la dinámica del citoesqueleto. La actividad de SOS1 está estrictamente controlada por el reclutamiento a la membrana, la unión alostérica a RAS y la fosforilación por retroalimentación, lo que lo convierte en un nodo clave en redes sensibles a factores de crecimiento. La desregulación de la señalización SOS1/RAS-MAPK es relevante en la biología de la señalización oncogénica y en trastornos del desarrollo, y respalda estudios mecanísticos sobre el reconfigurado de vías, el control de la amplitud de la señal y respuestas transcripcionales específicas del contexto.

Sos 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sos 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sos 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sos 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sos 1 en células tumorales con expresión de SOS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.