SOAT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423068

Descripción general

El gen Soat1 de ratón codifica la esterol O-aciltransferasa 1 (SOAT1), una enzima de membrana del retículo endoplásmico que esterifica el colesterol libre para formar ésteres de colesterilo utilizando como sustratos acil-CoA de ácidos grasos de cadena larga. Esta reacción contribuye a la homeostasis del colesterol, la biogénesis de gotículas lipídicas y la remodelación de lípidos de membrana, vinculando a SOAT1 con el almacenamiento lipídico celular y las respuestas al estrés del retículo endoplásmico. La actividad de SOAT1 se relaciona con las vías de tráfico de colesterol y metabolismo de lipoproteínas, y puede influir en la formación de células espumosas y en el manejo de lípidos por parte de los macrófagos. La acumulación desregulada de ésteres de colesterilo dependiente de SOAT1 se ha asociado con inflamación metabólica y patología impulsada por lípidos, lo que convierte a Soat1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos en modelos de aterosclerosis y enfermedades metabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SOAT1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Soat1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Soat1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Soat1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SOAT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Soat1 para la investigación de la señalización de SOAT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Soat1 críticos para la función de SOAT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Soat1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SOAT1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SOAT1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Soat1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SOAT1 (m) y el plásmido HDR SOAT1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Soat1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Soat1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.