SNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404028

Übersicht

Das humane SNX3 kodiert Sorting Nexin 3, ein endosomales Protein mit PX-Domäne, das an Phosphatidylinositol-3-phosphat bindet und hilft, den Membrantransport auf frühen Endosomen zu organisieren. SNX3 fungiert als wichtiger Hilfsfaktor des Retromer-Signalwegs, unterstützt das Recycling spezifischer transmembraner Frachtproteine vom Endosom zum Golgi sowie vom Endosom zur Plasmamembran und trägt zur Rezeptorsortierung, zur Homöostase von Nährstofftransportern und zur Abschwächung von Signalwegen bei. Durch seine Rolle in der endosomalen Sortierung und der Rückgewinnung von Cargo beeinflusst SNX3 Prozesse, die mit Wnt-Signalgebung, dem Umsatz von Membranrezeptoren und der zellulären Polarität verknüpft sind. Fehlregulierter endosomaler Transport und retromerassoziierte Fehl-Sortierung von Cargo werden mit neurodegenerativen sowie krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch SNX3 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur transportabhängigen Krankheitsbiologie darstellt.

Das SNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SNX3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SNX3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SNX3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SNX3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SNX3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SNX3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SNX3-Exone abzielen, die für die SNX3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SNX3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SNX3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SNX3 HDR-Plasmid (h) und SNX3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SNX3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SNX3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.