Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNX19: sc-406007-ACT

SNX19 (sorting nexin 19) humain code une sorting nexin contenant un domaine PX, impliquée dans l’association aux membranes dépendante des phosphoinositides et dans le trafic endosomal. En tant que composant du réseau plus large des sorting nexins, SNX19 est associée aux processus de transport de l’endosome vers le Golgi et de l’endosome vers la membrane plasmique, qui influencent le recyclage des récepteurs, le renouvellement des protéines membranaires et l’organisation spatiale de la signalisation. Par ces rôles dans le transport vésiculaire et la dynamique membranaire, une activité altérée de SNX19 peut affecter des voies de l’homéostasie cellulaire fréquemment perturbées dans des contextes de maladies complexes, notamment une signalisation dérégulée et des phénotypes métaboliques. SNX19 présente donc un intérêt pour des études mécanistiques reliant le trafic intracellulaire à la modulation des voies et aux changements d’état cellulaire.

SNX19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNX19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNX19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNX19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNX19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNX19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNX19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNX19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNX19 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNX19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.