Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNRPA: sc-404128-ACT

SNRPA code pour la petite ribonucléoprotéine nucléaire U1 A, un composant central du snRNP U1 qui reconnaît les sites d’épissage 5′ et initie l’assemblage du spliceosome lors de l’épissage du pré‑ARNm. Par son rôle dans la sélection des sites d’épissage et le couplage de la transcription au traitement de l’ARN, SNRPA contribue au maintien de l’intégrité du protéome et de programmes d’expression génique finement régulés. La perturbation de protéines spliceosomales telles que SNRPA peut remodeler les paysages d’épissage alternatif, en influençant des voies comprenant notamment la surveillance des ARN et le contrôle du cycle cellulaire. Une machinerie d’épissage dérégulée est fréquemment observée en oncologie comme dans des contextes neurodégénératifs, ce qui fait de SNRPA un nœud pertinent pour étudier le stress lié au traitement des ARN et la dépendance au spliceosome dans les cellules humaines.

SNRPA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNRPA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNRPA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNRPA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNRPA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNRPA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNRPA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNRPA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNRPA dans les cellules tumorales présentant une expression de SNRPA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.