SNAT1 Double Nickase Plasmid (m): sc-430613-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SNAT1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SNAT1 Double-Nickase-Plasmid (m) und SNAT1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc38a1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SNAT1: sc-137032
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SNAT1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430613-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc38a1 kodiert den natriumgekoppelten Transporter für neutrale Aminosäuren SNAT1 (System A), einen wichtigen Weg für die zelluläre Aufnahme von Glutamin, Alanin, Serin und verwandten Substraten in Mausgeweben. Durch die Regulation intrazellulärer Aminosäurepools beeinflusst SNAT1 die Nährstoffsensorik und die metabolische Homöostase, einschließlich Signalwege, die mit der mTORC1-Signalgebung, der Redox-Balance und der Verfügbarkeit von Neurotransmittervorstufen verknüpft sind. Im Nervensystem trägt SNAT1 zur Glutaminverwertung bei, die die glutamaterge und GABAerge Neurotransmission sowie den gesamten synaptischen Stoffwechsel unterstützt. Veränderte Aminosäuretransporte und eine Glutaminabhängigkeit sind an neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Prozessen sowie an metabolischer Umprogrammierung beteiligt, was Slc38a1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien nährstoffgetriebener zellulärer Phänotypen macht.
SNAT1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc38a1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc38a1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc38a1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc38a1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.