Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT1 (m): sc-430613
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SNAT1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SNAT1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SNAT1 Antibody (H-9): sc-137032
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT1 (m) | sc-430613 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Slc38a1 code le transporteur d’acides aminés neutres 1 couplé au sodium (SNAT1), un transporteur de type système A qui assure l’entrée, dépendante du Na⁺, de petits acides aminés neutres tels que la glutamine, l’alanine et la sérine à travers la membrane plasmique. En régulant la disponibilité intracellulaire des acides aminés, SNAT1 contribue à l’équilibre azoté cellulaire, à l’homéostasie rédox et à des programmes de signalisation métabolique, notamment la régulation de mTORC1 sensible aux acides aminés. Dans les tissus de souris, l’activité de SNAT1 est particulièrement importante pour la gestion des acides aminés par les neurones et les cellules gliales, qui soutient le cycle des neurotransmetteurs et les besoins bioénergétiques. Des altérations du transport des acides aminés neutres ont été associées à des réponses au stress métabolique et à des phénotypes liés à la neurobiologie, faisant de Slc38a1 une cible utile pour étudier le transport des nutriments et les interactions entre voies de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc38a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc38a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc38a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNAT1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc38a1 pour l'étude de la signalisation de SNAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Slc38a1 essentiels à la fonction de SNAT1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc38a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SNAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SNAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc38a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SNAT1 plasmide HDR (m) et le SNAT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc38a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc38a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.