Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
SNARK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405079
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SNARK El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SNARK, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SNARK Anticuerpo (C-12): sc-374348
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SNARK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405079 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
NUAK2 codifica SNARK (quinasa relacionada con SNF1/AMPK), una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que conecta el estado energético celular con programas de señalización adaptativos. SNARK se activa aguas abajo de LKB1/STK11 y participa en redes de fosforilación que influyen en la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y migración celular, y la regulación metabólica sensible al estrés. Las funciones descritas vinculan a NUAK2 con vías que controlan la transición epitelio‑mesénquima, las salidas transcripcionales asociadas a Hippo/YAP y el control dependiente del contexto de la proliferación y la supervivencia. La actividad desregulada de NUAK2/SNARK se ha asociado con la biología del cáncer y con fenotipos invasivos, lo que respalda su uso como diana en estudios mecanísticos del acoplamiento entre metabolismo y motilidad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SNARK (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NUAK2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NUAK2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NUAK2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SNARK.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NUAK2 para la investigación de la señalización de SNARK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de NUAK2 críticos para la función de SNARK
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NUAK2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SNARK CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SNARK CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NUAK2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SNARK (h) y el plásmido HDR SNARK (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NUAK2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NUAK2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.