Plasmide CRISPR/Cas9 KO Snapin (h): sc-406317

Présentation

SNAPIN code Snapin, une petite protéine cytosolique qui s’associe à la machinerie SNARE et aux complexes d’arrimage afin de soutenir l’amarrage des vésicules et l’exocytose régulée, en particulier dans les neurones et les cellules neuroendocrines. Snapin a été impliquée dans la préparation des vésicules synaptiques, la libération de neurotransmetteurs couplée au calcium et le trafic lié aux endosomes/lysosomes via des interactions qui coordonnent les événements de fusion membranaire. En influençant la transmission synaptique et le transport intracellulaire, SNAPIN est fréquemment étudiée dans des voies pertinentes pour la connectivité neuronale, la fonction autophagie–lysosome et la signalisation en réponse au stress. Des altérations du trafic dépendant de Snapin ont été explorées dans le cadre de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, où le transport vésiculaire et la protéostasie sont perturbés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Snapin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNAPIN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNAPIN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNAPIN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Snapin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNAPIN pour l'étude de la signalisation de Snapin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNAPIN essentiels à la fonction de Snapin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNAPIN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Snapin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Snapin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNAPIN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Snapin plasmide HDR (h) et le Snapin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNAPIN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNAPIN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.